La PCR (polymerase chain reaction)

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La PCR (polymerase chain reaction) permet d’amplifier spécifiquement une région de DNA
double brin de quelques centaines de paires de bases. Ce DNA doit d’abord être séparé en simples
brins (dénaturation à 95°C).
• On ajoute au DNA de départ une large quantité d’amorces (oligonucléotides synthétiques
complémentaires des deux extrémités de la région à amplifier) qui vont s’hybrider à 50-60°C
environ avec la séquence complémentaire sur chacun des brins de DNA, et les quatre dNTP
qui serviront de substrats.
• On soumet le tout à l’activité d’une DNA polymérase (Taq polymerase) qui synthétise à 72°C
un brin complémentaire à partir du 3’OH de l’amorce hybridée. On obtient quatre brins de
DNA.
• On recommence à dénaturer ces 4 brins, puis on les laisse s’hybrider avec les amorces (toujours
en excès) et la polymérase entre en action pour aboutir à 8 brins de DNA.
• On recommence à dénaturer ces 8 brins, puis on les laisse s’hybrider avec les amorces (toujours
en excès) et la polymérase entre en action pour aboutir à 16 brins de DNA.
• Et ainsi de suite 35 fois, ce qui aboutit à 34359738368 brins de DNA (34 milliards), ce qui
représente une quantité suffisante pour étudier le fragment de DNA amplifié.